好评| 拉丁名称 | Escherichia coli bacteriophage MS2 |
| 主要用途 | 水测试 对照培养物 参考 USEPA 病毒学方法手册，第 16 章。华盛顿特区：环境保护局；EPA EPA 600/4-84/013 (N16)，2001 水中的大肠杆菌噬菌体 参考 9224 C：使用雄性特异性大肠杆菌噬菌体测定大肠杆菌Famp。华盛顿特区：美国公共卫生协会；水和废水检验标准方法，2005 APHA9224 - 大肠杆菌噬菌体检测；。通过两步富集程序在水中控制菌株参考环境保护局雄性特异性 (F+) 和体细胞大肠杆菌噬菌体。华盛顿特区：环境保护局；EPA EPA 方法1601, 2001 参考环境保护局通过单琼脂层(SAL) 程序测定水中的雄性特异性 (F+) 和体细胞大肠杆菌噬菌体。华盛顿特区：环境保护署；EPA EPA 方法 1602, 2001 噬菌体检测参考水质 --- 噬菌体检测和计数 --- 第 1 部分：F 特异性 RNA 噬菌体计数 [BS EN ISO 10705-1:2001 ]。英国伦敦：英国标准协会；英国标准 BS 6068-4.11：1996。测试参考饮用水中 MS2 病毒的灭活。华盛顿特区：环境保护局；EPA EPA NSF 02/03/EPADWCTR。物理去除微生物和颗粒污染物的设备验证测试参考协议。华盛顿特区：环境保护局；EPA EPA 05/9205/EPADWCTR。 |
| 培养基 | ATCC 培养基 271：大肠杆菌培养基 |
| 生长特性 | 需氧,37℃ |
| 特征特性 | 病毒,噬菌体,宿主:大肠杆菌C-3000 (ATCC 15597) |
| 使用方法 | 遵循下面给出的噬菌体繁殖的一般程序。推荐宿主为大肠杆菌菌株 C-3000 (ATCC 15597)。噬菌体繁殖的一般程序。要从冻干或冷冻小瓶中回收噬菌体：在打开噬菌体小瓶之前，准备推荐宿主菌株的活跃生长培养物。主机年龄应为 16-18 小时。从分离板中挑取一个菌落，并在 5 mL 适当的肉汤中匀浆。在 37°C 下培养，同时摇动 (160-180 rpm)，直至生长达到 OD600 0.1 至 0.4。将大约1.0 mL 推荐的肉汤添加到冻干噬菌体小瓶中，或将0.5 mL 添加到液体冷冻管中。用 100 µL 噬菌体感染每个 5 mL 培养物。在37°C 下以 160-180 rpm 的速度摇动过夜。 16 至 18 小时后，将噬菌体培养物以 4000 g 离心10 分钟。用 0.2 µm 或0.45 µm PES 无菌过滤器过滤裂解液。滤液可在4℃保存。在进行点滴定之前，将一两个板加热至 37°C。融化软琼脂（在推荐培养基中添加 0.5% 琼脂）并保持在 43°C 至45°C 直至准备使用。最好让融化的琼脂在此温度下保持约一个小时，以确保其冷却至43°C至45°C。较高的温度可能会杀死宿主。将步骤 1 中的 50 至 100 µL 宿主培养物添加到上述步骤 5 中的每 9 mL（大约）软琼脂中。立即用 2.5 mL 覆盖每个板的表面。让覆盖层硬化 10 到 20 分钟。噬菌体裂解物可以在 96 孔板中连续稀释四次（如果需要）。将 90 µL 肉汤培养基等分到每个孔中。将步骤 3 中的 10 µL 噬菌体滤液添加到每个孔中并混合。将 10 µL 从第一次稀释的每个孔转移到第二次稀释的每个孔中并混合。继续进行所需的稀释倍数。将步骤 6 中的每种稀释液点2 µL 到板上。90 mm 培养皿最多可容纳 8 个稀释液。过夜培养后，应该可以看到裂解。在较高的稀释度下，单个噬菌斑应该是可计数的。要计算 pfu/mL，请使用以下公式： pfu/mL = 平均噬菌斑计数 / [（稀释因子）(2x10-3 mL)] 将噬菌体点在平板上可以更轻松地观察裂解情况。如果在倒入平板之前将噬菌体直接添加到软琼脂中，则可能很难看到模糊或微小的噬菌斑。耐药宿主细菌也可能掩盖菌斑形成。繁殖噬菌体：确定所需的总体积并将此量的肉汤放入烧瓶中。将少量过夜宿主培养物添加到烧瓶中，并在 37°C 下培养，同时摇动，直至生长达到 OD600 0.1 至 0.4。 2. 使用以下公式用计算体积的噬菌体裂解物进行感染。添加的噬菌体体积 (ml) = (8x108 x 总培养体积 (ml) x OD600 x MOI) / 噬菌体滴度(PFU/ml)。在 37°C 下以 160-180 rpm 的速度摇动过夜。 3. 将噬菌体培养物以 4000 g 离心10 分钟。用 0.2 µm 或0.45 µm PES 无菌过滤器过滤裂解液。滤液可在4℃保存。 4. 裂解物应在冷藏条件下长期保持活力。它们也可以在有或没有冷冻保护剂的情况下冷冻。如果可以的话，液氮储存是长期储存的最佳方法。大多数噬菌体也可以冷冻干燥。 ATCC 使用双倍浓度脱脂牛奶，与滤液各半混合。注意：为了获得最高的 PFU 和总体积，如果严格遵循该过程，上面详细介绍的肉汤方法已显示出最佳结果。然而，如果没有任何设备，或者由于其他原因无法使用该技术，则下述 Adam 叠加方法将为较小的体积提供令人满意的滴度计数的足够结果。 （Adams 琼脂覆盖法，如 MH Adams' Bacteriophages, Interscience Publishers, Inc., New York, 1959 中所述） 要使用Adam's Overlay 方法回收噬菌体：在打开噬菌体小瓶之前，准备推荐宿主的活跃生长的肉汤培养物拉紧。主机应处于早期日志阶段。培养时间因物种而异，但通常不超过 16 至 18 小时。在 37°C 培养箱中预热推荐培养基的板。融化软琼脂（在推荐培养基中添加 0.5% 琼脂）并保持在 43°C 至45°C 直至准备使用。最好让融化的琼脂在此温度下保持约一个小时，以确保其冷却至43°C至45°C。较高的温度可能会杀死宿主。将步骤 1 中的一到两滴宿主培养物添加到上述步骤 3 中的每 9 mL（大约）软琼脂中。立即在每个板的表面覆盖 2.5 mL。让覆盖层硬化 10 到 20 分钟。将大约 1.0 mL 推荐的肉汤添加到冻干噬菌体小瓶中，或将 0.5 mL 添加到液体冷冻管中。将小瓶中的全部内容物转移到装有推荐肉汤培养基的试管中。根据需要对多次传代进行 1:10 连续稀释。将每种稀释液的一滴点在准备好的覆盖板的表面上。让其干燥。每个板上最多可以放置四种稀释液，但是，可能很难防止斑点相互碰撞。这取决于生物学家的判断。在建议温度下培养 16 至 18 小时。对于生长较慢的主机，可能需要 24 小时。繁殖噬菌体：可以通过按照上述步骤 3 和 4 制备覆盖板并用大约 0.5 mL 浓缩噬菌体覆盖表面来繁殖噬菌体。或者，您可以将噬菌体直接添加到带有宿主的融化琼脂中，然后倒在平板上。对于较大量，可以使用推荐的琼脂和约 12.0 mL 融化的软琼脂（将宿主倒在表面上）制备大尺寸 T 烧瓶。让覆盖层硬化。将大约 1.0 mL 推荐的肉汤添加到冻干噬菌体小瓶中，或将 0.5 mL 添加到液体冷冻管中。将小瓶中的全部内容物转移至 T 型烧瓶中并使其流过硬化表面。培养过夜。当观察到裂解时，刮去琼脂板或 T 型瓶表面的软琼脂。以约 1000 rpm 的速度离心 25 分钟，沉淀细胞碎片和琼脂。吸出上清液并保留。上清液通过 0.22 μm Millipore 过滤器，滤液在 4°C 至8°C 下保存。可能需要进行第二次过滤才能完全去除宿主。 |
| 保存说明 | 2°C 至 8°C |
